【摘 要】
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目的探讨小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)N蛋白原核表达、条件优化及反应活性。方法参照GenBank中PPRV (Nigeria/75/1)N基因序列,人工合成该基因,构
【机 构】
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新疆畜牧科学院兽医研究所(新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心); 新疆农业大学动物医学学院;
【基金项目】
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国家重点研发计划项目“边境地区外来动物疫病阻断及防控体系研究”项目(2017YFD0501800)“边境地区家养动物外来动物疫病监测溯源技术研究”课题(2017YFD0501801);新疆维吾尔自治区创新环境建设专项科技创新基地建设项目“新疆兽医微生物资源共享平台建设”(PT1809);新疆维吾尔自治区自然基金“小反刍兽疫病毒主要保护性抗原基因的优化及免疫协同关系研究”(2018D01A41)
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目的探讨小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)N蛋白原核表达、条件优化及反应活性。方法参照GenBank中PPRV (Nigeria/75/1)N基因序列,人工合成该基因,构建重组表达质粒pET-30a (+)-N,转化至BL21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳、Western-blot分析。在不同温度、时间、IPTG浓度条件下诱导表达N蛋白,确定最佳表达条件。结果 PPRV N蛋白(64.4kD)成功表达,能被羊PPRV免疫血清所识别。N蛋白主要以包涵体存在,其最佳诱导条件:诱导温度28℃、IPTG终浓度2.0mmol/L、诱导时间16h。结论原核表达的PPRV N蛋白具有良好的特异性和反应活性,为单克隆抗体的制备及快速诊断方法的建立提供了技术资料。
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