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目的观察不同冻存液对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,hUC-MSC)冻存复苏后生物学特性的影响,优化冻存方法。方法脐带取自2011年1月至2011年12月在中山大学附属第三医院产科剖宫产的足月健康产妇。从脐带分离得到的hUC-MSC培养传代,取第3代细胞。根据冻存液不同分为3组,A组冻存液为二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)∶胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)∶低糖杜氏培养基(low glucose Dulbecco’s modified Eagle’s medium,LG-DMEM)为1∶2∶7,B组为DMSO∶FBS∶LG-DMEM为1∶5∶4,C组为DMSO∶FBS为1∶9,不含LG-DMEM。经冻存12个月,复苏细胞,以第3代未冻存细胞悬液作为对照组,采用台盼蓝染色法比较hUC-MSC的细胞存活率,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法比较细胞的生长情况绘制生长曲线,倒置显微镜下观察细胞的生长状况,采用流式细胞仪检测各组细胞的表面标记。结果A、B、C三组的细胞存活率分别为(20±4)%、(71±8)%和(85±7)%。与C组比较,A组和B组的细胞存活率降低,差异有统计学意义(均为P<0.05)。细胞生长曲线显示,与对照组相比,C组hUC-MSC在各时间点细胞生长迅速,但差异无统计学意义(P>0.05);B组hUC-MSC在24 h、48 h、72 h细胞生长差异无统计学意义(P>0.05),在96 h时间点生长速率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而A组hUC-MSC在各个时间点细胞生长减慢,差异有统计学意义(均为P<0.05)。形态学观察显示,A组细胞胞体宽大多角,并且较多分支,B组和C组细胞饱满,折光性好,呈长梭形、纺锤形或多角形。A组细胞复苏后细胞数目过少无法进行表面标记,B组和C组hUC-MSC表面标记物CD31、CD34、CD45、人类白细胞抗原(HLA)-DR表达阴性,CD105、CD90、CD44表达阳性。结论含高浓度血清的冻存液适合hUC-MSC的长期保存,含90%FBS的冻存液为hUC-MSC的最佳冻存保护液。