【摘 要】
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目的培养高纯度的大鼠睾丸支持细胞,并应用检测ABP mRNA原位杂交方法加以鉴定。方法选用18~22d龄SD雄性大鼠睾丸,采用0.25%胰蛋白酶、0.1%透明质酸酶、0.1%胶原酶三酶依次消
【机 构】
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华中科技大学同济医学院计划生育研究所; 华中科技大学同济医学院解剖学教研室; 华中科技大学同济医学院计划生育研究所 武汉430030;
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目的培养高纯度的大鼠睾丸支持细胞,并应用检测ABP mRNA原位杂交方法加以鉴定。方法选用18~22d龄SD雄性大鼠睾丸,采用0.25%胰蛋白酶、0.1%透明质酸酶、0.1%胶原酶三酶依次消化法分离支持细胞,置于32℃5%CO2的培养箱培养,48h后用20mmol/L Tris-HCl低渗处理培养细胞。培养1周后应用伊红染色、吖啶橙荧光染色、Feulgen染色对所培养的支持细胞进行鉴定,同时应用原位杂交检测ABP mRNA方法鉴定分离培养的支持细胞。结果培养1周后所获培养的支持细胞纯度达95%以上。分离培养的支持细胞ABP mRNA表达阳性,其形态结构特征与用其他方法鉴定为支持细胞的形态结构特征一致。结论采用三酶连续消化及低渗处理法分离培养的支持细胞纯度高,而且应用原位杂交方法检测ABP mRNA是一种新的、特异、有效的鉴定支持细胞及其功能的方法。
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