【摘 要】
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目的构建耻垢分枝杆菌末端结合蛋白Ku原核表达载体,并进行表达纯化及酶学测定。方法以耻垢分枝杆菌str.MC2 155基因组DNA为模板,PCR法扩增ku基因,构建pQE-30-ku重组质粒,在表
【机 构】
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中国人民解放军第一七五医院/厦门大学附属东南医院检验科,中国人民解放军第一七五医院/厦门大学附属东南医院细胞生物治疗中心
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目的构建耻垢分枝杆菌末端结合蛋白Ku原核表达载体,并进行表达纯化及酶学测定。方法以耻垢分枝杆菌str.MC2 155基因组DNA为模板,PCR法扩增ku基因,构建pQE-30-ku重组质粒,在表达宿主菌E.coli M15中诱导表达蛋白,Ni2＋-NTA亲和层析柱纯化,最后通过凝胶迁移电泳实验测定Ku蛋白与5′粘末端、3′粘末端和平末端3种不同末端DNA结合情况。结果成功构建了ku原核表达载体pQE-30-ku,并能在宿主菌E.coli M15中表达,纯化后具有结合不同末端DNA的酶活性。结论 Ku基因克
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