【摘 要】
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目的 改良并完善顺铂诱导小鼠慢性肾脏疾病模型,研究其肾功能、组织结构及分子水平的改变.方法 对不同周龄雄性C57BL/6小鼠注射不同剂量顺铂,观察小鼠生存率,选取合适的顺铂剂量及小鼠周龄用以制备模型.通过酶联免疫吸附试验测定顺铂注射后小鼠血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平的变化,采用免疫荧光(IF)、马松三色(MT)染色和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法观察顺铂注射对肾纤维化的影响,采用IF、苏木精-伊红(HE)染色和RT-qPCR方法观察顺铂注射对小鼠肾组织中细胞因子和炎症细胞浸润的影响.
【机 构】
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青岛大学基础医学院病理学与病理生理学系,山东 青岛 266071;滨州医学院基础医学院生理学教研室;青岛大学基础医学院病理学与病理生理学系,山东 青岛 266071;滨州医学院基础医学院生理学教研室
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目的 改良并完善顺铂诱导小鼠慢性肾脏疾病模型,研究其肾功能、组织结构及分子水平的改变.方法 对不同周龄雄性C57BL/6小鼠注射不同剂量顺铂,观察小鼠生存率,选取合适的顺铂剂量及小鼠周龄用以制备模型.通过酶联免疫吸附试验测定顺铂注射后小鼠血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平的变化,采用免疫荧光(IF)、马松三色(MT)染色和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法观察顺铂注射对肾纤维化的影响,采用IF、苏木精-伊红(HE)染色和RT-qPCR方法观察顺铂注射对小鼠肾组织中细胞因子和炎症细胞浸润的影响.结果 选择8周龄小鼠,通过腹腔注射7 mg/kg顺铂(每周1次,共4次)构建慢性肾脏疾病模型.与对照组(小鼠腹腔注射无菌生理盐水)比较,顺铂注射24、42 d小鼠Scr和BUN水平显著升高(F=12.05、41.89,P<0.01),肾脏纤维化面积显著增加(F=78.87,P<0.01),肾纤维化相关基因胶原纤维1α1(Col1α1)和纤连蛋白(Fn)mRNA表达水平明显升高(F=37.01、57.10,P<0.01),肾组织炎性细胞、CD3+T细胞和F4/80+巨噬细胞浸润明显增加,肾组织炎症相关细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平显著升高(F=10.24～86.82,P<0.01).注射42 d小鼠上述指标变化较注射24 d小鼠更明显(P<0.01).结论 反复低剂量顺铂腹腔注射后肾脏发生纤维化、慢性炎症和功能障碍.本研究通过缩短模型制备周期以及减少顺铂用药剂量,完善了顺铂诱导肾纤维化和慢性炎症小鼠模型.
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