【摘 要】
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目的 构建1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)反式激活因子(Tat)基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达.方法 以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过FCR扩增HI
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目的 构建1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)反式激活因子(Tat)基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达.方法 以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过FCR扩增HIV-1 tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pCDNA31(+),构建重组真核表达质粒pCDNA31-tat,经限制性内切酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入人体肝癌细胞系Huh-7细胞.RT-PCR检测其基因转录情况,Western blot鉴定其是否能够表达相应的目的 蛋白质.结果 成功扩增了Tat基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,RT-PCR和Western blot方法证实该质粒能在Huh-7真核细胞中有效表达HIV-1 Tat目的 蛋白质.结论 成功构建了HIV-1 Tat基因的真核表达质粒载体,并在Huh-7细胞中表达,为在Huh-7细胞模型中研究Tat的功能奠定了基础.
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