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[目的]探索多年生黑麦草的愈伤组织诱导和植株再生,为多年生黑麦草的转基因研究奠定基础.[方法]以多年生黑麦草成熟种子为外植体,施以浓度不同的外源激素,探讨不同激素组合对愈伤组织诱导、继代培养以及植株分化的影响.愈伤组织诱导以MS培养基为基础培养基,添加300 mg/L水解酪蛋白,300 mg/L脯氨酸,300 mg/L谷氨酰胺,并附加不同浓度2,4-D(2、4、5、8、10mg/L)和6-BA(0.025、0.100、0.200、0.300、0.400、0.500mg/L),pH值调节至5.8.继代培养基为MS+2,4-D减半的诱导培养基.愈伤组织分化以MS培养基为基础培养基,添加300 mg/L水解酪蛋白,300 mg/L脯氨酸,300 mg/L谷氨酰胺,并附加不同浓度6-BA(0.50、1.0、2.0、3.0 mg/L).pH值调节至5.8.[结果]黑麦草在附加了8 mg/L2,4-D和0.025 mg/L6-BA的MS培养基中诱导率最高,达56.42%.愈伤组织经过2～3次继代后分化,分化培养附加2.0 mg/L 6-BA,分化率最高.达34.14%,且愈伤组织继代后的状态明显影响分化率,带有毛状根的愈伤组织分化能力明显低于表面光洁的愈伤组织.在大量元素减半的MS培养基中附加0.5 mg/L NAA进行生根培养,生根率达98%.[结论]建立了高频的遗传再生体系,移栽成活率可达98%.