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研究线粒体DNA参与蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮(hRPE)细胞凋亡的作用机制及与时间的关系。
方法用发光二极管(LED)蓝光光源造成蓝光损伤体外培养的hRPE细胞模型，蓝光辐照度为(4.0±0.5)mW/cm2，并将细胞分为光照0(正常对照组)、0.5、1、2、4、6、12和24 h处理组。免疫荧光染色鉴定人原代hRPE细胞；Western blot法检测caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9、cleaved caspase-9、bax和bcl-2蛋白的表达情况；实时荧光PCR检测线粒体DNA拷贝数；普通PCR检测线粒体DNA 4977bp缺失。
结果分离的细胞呈长梭形、三角形或不规则形，RPE65特异地表达在细胞质中。凋亡蛋白bax从光照后1 h显著上调；cleaved caspase-3从光照后2 h开始表达水平均显著高于正常对照组；caspase-3、caspase-9和cleaved caspase-9从光照后4 h开始表达水平均显著高于正常对照组；bcl-2从光照后2 h开始表达水平均较正常对照组下调，与正常对照组比较凋亡相关蛋白的表达差异均有统计学意义(均P<0.05)。实时荧光PCR检测正常对照组线粒体DNA拷贝数较光照0.5、1、2、4、6、12和24 h处理组降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。普通PCR检测光照0.5、1、2、4、6、12和24 h处理组线粒体DNA 4977bp缺失表达水平高于正常对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
结论蓝光可导致线粒体DNA损伤，进而激活细胞凋亡系统，尤其是线粒体凋亡通路，导致细胞损伤。