【摘 要】
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采用PCR的方法,以Bacillus macerans 总DNA为模板,构建出β1,31,4葡聚糖酶杂合基因bglHAM,与巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K重组,得到重组质粒pPIC9KHAM,电脉冲转化法转化酵母
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)
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采用PCR的方法,以Bacillus macerans 总DNA为模板,构建出β1,31,4葡聚糖酶杂合基因bglHAM,与巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K重组,得到重组质粒pPIC9KHAM,电脉冲转化法转化酵母菌GS115,KM71.在MM,MD平板上筛选表型,YPDG418平板上筛选多拷贝重组子.重组菌株经甲醇诱导后,刚果红平板染色法检测到β葡聚糖酶活性,SDSPAGE证明表达产物的分子量约为24 kD,摇瓶诱导培养筛选到的重组菌株,胞外每mL发酵液最高酶活达240 U.
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