【摘 要】
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目的构建miR-34a重组慢病毒载体，观察其转染后对肝癌细胞活力、细胞周期和凋亡的影响，并观察转染后对阿霉素体外抑制肝癌细胞生长的影响。方法构建含miR-34a基因的重组慢病毒载体，转染人肝癌细胞并阿霉素干预后，测定细胞活性、检测细胞周期、凋亡及相关蛋白表达水平的变化。结果成功构建了miR-34a的重组慢病毒载体LV-hsa-mir-34a(元件顺序：Ubi-MCS-SV40-EGFP-IRES-
【机 构】
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目的构建miR-34a重组慢病毒载体，观察其转染后对肝癌细胞活力、细胞周期和凋亡的影响，并观察转染后对阿霉素体外抑制肝癌细胞生长的影响。
方法构建含miR-34a基因的重组慢病毒载体，转染人肝癌细胞并阿霉素干预后，测定细胞活性、检测细胞周期、凋亡及相关蛋白表达水平的变化。
结果成功构建了miR-34a的重组慢病毒载体LV-hsa-mir-34a(元件顺序：Ubi-MCS-SV40-EGFP-IRES-puromycin)，经质粒酶切和测序鉴定正确。与对照组比较，重组慢病毒载体转染肝癌细胞后miR-34a表达上调，差异有统计学意义(HepG2: t＝15.36，P<0.01; Hep3B: t＝36.75, P<0.01; Bel-7402: t＝24.17, P<0.01)。与对照组比较，miR-34a表达上调并阿霉素干预后肝癌细胞活力下降(HepG2: t＝7.12, P<0.01; Hep3B: t＝8.89, P<0.01; Bel-7402: t＝13.62, P<0.01)，G1期细胞显著增多(HepG2: F＝137.65, P<0.01; Hep3B: F＝143.39, P<0.01; Bel-7402: F＝1 306.47, P<0.01)，细胞凋亡增加(HepG2: F＝386.14, P<0.01; Hep3B: F＝881.94, P<0.01; Bel-7402: F＝885.89, P<0.01)，差异有统计学意义，细胞周期蛋白和凋亡蛋白发生相应改变。
结论构建miR-34a重组慢病毒载体并转染肝癌细胞后可高效表达miR-34a，miR-34a高表达可以降低肝癌细胞的恶性生物学行为。miR-34a重组慢病毒载体感染肝癌细胞后，阿霉素对肝癌细胞的抑制作用显著增强。
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