【摘 要】
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目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对细胞周期素B2启动子(cyclin B2p)转录水平的调节作用.方法 根据文献确定cyclin B2的启动子区域,聚合酶链反应(PCR)扩增cyclin B2p,克隆至真核报
【机 构】
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新疆医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室,北京地坛医院传染病研究所
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目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对细胞周期素B2启动子(cyclin B2p)转录水平的调节作用.方法 根据文献确定cyclin B2的启动子区域,聚合酶链反应(PCR)扩增cyclin B2p,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-cyclin B2p报告载体;以该质粒转染人肝HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并以不同剂量(5、10、50、100 μmol/L)的As2O3刺激HepG2细胞,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果 正确克隆了cyclin B2p.用5～50μmol/L的As2O3刺激pCAT3-cyclin B2p转染的HepG2细胞,CAT活性有剂量-反应关系;10 μmol/l As2O3刺激pCAT3-cyclin B2p瞬时转染的HepG2细胞后,报告基因CAT的表达活性为pCAT3-Basic空载体的5.84倍(0.485/0.083),是报告载体pCAT3-cyclin B2p的1.95倍(0.485/0.249).结论 克隆的cyclin B2p有顺式激活下游基因表达的活性;一定剂量的As2O3对HepG2细胞cyclin B2有上调作用.
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