【摘 要】
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目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）对卡介苗（BCG）诱导巨噬细胞凋亡的调控作用。方法 Q-PCR检测活动性结核患者外周血中TRAF6的表达后利用不同感染复数的BCG感染RAW264.7细胞，在感染的不同时间通过Q-PCR和Western blot检测巨噬细胞中Caspase 3和TRAF6的表达。时间梯度试验处理组分为5组：对照组（未感染，C）、BCG感染6 h组、12 h组、18
【机 构】
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西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金（32060160,32160162）； 宁夏自然科学基金（2022AAC02009）～～；
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目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）对卡介苗（BCG）诱导巨噬细胞凋亡的调控作用。方法 Q-PCR检测活动性结核患者外周血中TRAF6的表达后利用不同感染复数的BCG感染RAW264.7细胞，在感染的不同时间通过Q-PCR和Western blot检测巨噬细胞中Caspase 3和TRAF6的表达。时间梯度试验处理组分为5组：对照组（未感染，C）、BCG感染6 h组、12 h组、18 h组和24 h组；感染复数试验处理组分为5组：对照组（未感染，C）、5 MOI组、10 MOI组、15 MOI组和20 MOI组。随后，通过小干扰RNA技术敲减RAW264.7细胞中TRAF6的表达，并结合BCG感染建立TRAF6敲减模型。TRAF6敲减实验分为4组：阴性对照组（NC）、BCG单独感染组（BCG）、TRAF6小干扰RNA单独处理组（siRNA）和TRAF6小干扰RNA与BCG共处理组（siRNA+BCG）。利用平板涂布法检测巨噬细胞菌载量变化。通过流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率和线粒体膜电位变化。利用Western blot检测TRAF6、Caspase 3、PARP、Bcl-2,BAX的表达。使用免疫荧光技术检测TRAF6与Caspase 3的表达。结果与健康人群相比，活动性结核患者外周血中TRAF6高表达（P＜0.001）。BCG感染显著上调RAW264.7中TRAF6与Caspase 3的表达，且当感染时间为18 h（P=0.03,P=0.04），感染复数为15时二者表达量最高（P＜0.001,P＜0.001）。敲减TRAF6上调BCG感染的巨噬细胞内的菌载量（P=0.05）。与BCG单独处理组相比，敲减TRAF6显著抑制BCG感染的巨噬细胞凋亡率（P＜0.001），并显著下调Caspase 3（P=0.002）和PARP的表达（P＜0.001）。同时，BCG感染RAW264.7细胞的线粒体膜电位上升（P＜0.001），而敲减TRAF6抑制BCG感染的巨噬细胞线粒体膜电位（P＜0.001）。敲减TRAF6显著下调BCG感染巨噬细胞中BAX表达（P=0.005）的同时上调Bcl-2的表达（P=0.04）。结论 TRAF6通过内源性凋亡通路促进BCG感染的巨噬细胞凋亡。
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