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设计含有与面包酵母（Saccharomyces cerevisiae BY-6）编码酸性海藻糖酶ATH基因内部部分序列同源的长引物，以质粒pUG6为模板进行PCR构建带有Cre／loxP系统的敲除单元，转化面包酵母获得G418阳性克隆。将铜抗性基因（CUP1-MT1）导入Cre重组酶表达质粒pSH47，得到重组质粒pSH—CUP,并转化阳性克隆，以铜抗性筛选面包酵母转化子。半乳糖诱导表达Cre酶切除Kan^r基因。重组质粒pSH．CUP的构建，不仅解决了酵母转化子筛选标记问题和非酵母基因的引入，而且使Lo