【摘 要】
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提取人工分离、培养的中华绒螯蟹颤抖病病原螺原体的基因组DNA,并进行梯度稀释作为PCR模板,根据GenBank已有螺原体16S rRNA基因序列设计出套式PCR外部引物,将螺原体特异性引
【机 构】
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江苏省生物多样性与生物技术重点实验室南京师范大学生命科学学院,江苏省生物多样性与生物技术重点实验室南京师范大学生命科学学院,江苏省生物多样性与生物技术重点实验室南京师范大学生命科学学院 江苏南京210
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提取人工分离、培养的中华绒螯蟹颤抖病病原螺原体的基因组DNA,并进行梯度稀释作为PCR模板,根据GenBank已有螺原体16S rRNA基因序列设计出套式PCR外部引物,将螺原体特异性引物作为内部引物,利用套式PCR对梯度稀释的模板进行扩增,得到271 bp产物,对照已有的一步PCR检测法,检测灵敏度提高100倍,最小检测达15.5 fg数量级螺原体DNA,从而建立更为灵敏的中华绒螯蟹颤抖病病原螺原体的检测方法。
Genomic DNA of artificial and isolated mitochondrial DNA of Acinetobacter bilis was extracted and gradient-diluted as a template. According to the 16S rRNA gene sequence of GenBank, The specific primer was used as the internal primer to amplify the gradient-diluted template by nested PCR to obtain a 271 bp product. Compared with the existing one-step PCR assay, the detection sensitivity was improved by 100 times and the minimum detection was 15.5 fg. DNA, so as to establish a more sensitive method for detecting the pathogen of spirochete trembling in sinensis.
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