人视黄醇结合蛋白原核蛋白表达和兔多克隆抗体的制备

来源 :细胞与分子免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tanzhiming1985
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目的制备兔抗人视黄醇结合蛋白(RBP)多克隆抗体。方法逆转录PCR扩增人RBP基因,将扩增产物连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-RBP,转化至大肠杆菌中。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,表达产物经SDS-PAGE分析鉴定出阳性克隆,扩大培养。用组蛋白标签(His-tag)纯化柱纯化重组蛋白。将纯化的重组蛋白皮下注射到新西兰白兔, 4次加强免疫得到抗血清。从抗血清中纯化出抗RBP多克隆抗体,并进行SDS-PAGE、 ELISA和Western blot法鉴定。结果成功构建了重组质粒pET-28a(+)-RBP,并获得高纯度的RBP重组蛋白, ELISA检测结果显示抗体效价达到1∶512 000。结论成功制备兔抗人RBP多克隆抗体。
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