【摘 要】
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[目的]提高蓝藻抗病毒蛋白-N（CVN）的异源表达量,获得大量高纯度可溶性蛋白。[方法]采用RT-PCR从酱油发酵酱醪宏基因组中克隆获得CVN基因cvn-SF,构建了重组表达载体p ET32a-cvn-
【机 构】
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华南农业大学食品学院食品生物技术研究所; 广东省微生态制剂工程技术研究中心; 广州市澳键丰泽生物科技有限公司;
【基金项目】
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国家自然基金项目(“食用真菌组合表达白藜芦醇的研究”,No.31272217);广东省科技计划项目(“安全农业投入品新型益生芽孢杆菌素高产菌种选育研究”,No.2015A020209121)
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[目的]提高蓝藻抗病毒蛋白-N（CVN）的异源表达量,获得大量高纯度可溶性蛋白。[方法]采用RT-PCR从酱油发酵酱醪宏基因组中克隆获得CVN基因cvn-SF,构建了重组表达载体p ET32a-cvn-SF,转化E.coli BL21菌株,获得工程菌株,优化表达条件,通过Ni-NTA凝胶亲和层析对CVN-SF蛋白进行纯化。[结果]工程菌株在温度30℃、添加1 mmol/L的IPTG诱导剂、培养时间12 h的条件下获得最高表达量的可溶性蛋白。Ni-NTA凝胶亲和层析纯化得到了230.8 mg/L的CVN蛋白,占提取总蛋白含量的33.37%。[结论]所得CVN蛋白高于目前报道的CVN在大肠杆菌的最高表达量140 mg/L[11]。
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