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研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand，r4-1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus-16，HPV16)蛋白疫苗(HPV16蛋白疫苗)免疫效果的影响。
方法对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化，并通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点定向插入pET28a表达载体。将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21(DE3)，并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达。用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定，并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构。用CCK-8试剂盒检测纯化r4-1BBL对小鼠T细胞体外增殖的影响。同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠，用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平，观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响。
结果密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达，且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在。可溶性产物的结构主要为二聚体，电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构。纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖。与单纯HPV16蛋白疫苗相比，r4-1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答(t＝3.525，P＝0.024)和产生更明显的肿瘤生长抑制作用(t＝2.534，P＝0.021)。
结论r4-1BBL能在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果，具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力。