β1转化生长因子浓度对体外诱导骨髓间充质细胞构建软骨的影响

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目的 探讨β1转化生长因子(TGF-β1)浓度对体外诱导猪骨髓间充质细胞(BMSCs)构建组织工程化软骨的影响,明确TGF-β1诱导剂量对细胞分化的作用,为体外软骨构建提供适宜的诱导因子应用浓度参数.方法 抽取8周龄猪髂嵴骨髓,应用贴壁法分选单个核细胞,体外培养扩增后获得BMSCs,收集第2代细胞,以5×107个/cm3细胞的密度接种到聚羟基乙酸(PGA)制成的圆柱形三维支架材料上(直径5 mm,厚度2 mm),7 d后应用不同浓度TGF-β1(A组:5 ng/ml、B组:10 ng/ml、C组:20ng/ml、D组:50 ng/ml)与IGF-Ⅰ(50 ng/ml)及地塞米松(40 ng/ml)组成诱导剂,分别进行体外诱导培养.8周后取材行大体观察,体积、湿重及聚合蛋白多糖(GAG)定量,组织学及Ⅱ型胶原免疫组织化学等检测.结果 B、C、D组形成细胞材料复合物组织学结构较为类似,有明显的软骨陷窝,分布有大量Ⅱ型胶原及GAG;A组软骨陷窝结构较少,胞外基质染色较浅.B、C、D组的组织湿重、体积和GAG含量均明显高于A组.结论 诱导三维支架上的BMSCs体外构建组织工程化软骨过程中,10 ng/ml的TGF-β1诱导浓度具有良好的促分化效能,TGF-1的促分化作用并未表现出明显的剂量依赖性。

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