探讨过表达微小RNA－7(miR－7)对肝癌HepG2细胞体外增殖和侵袭能力的影响及调控机制。
方法采用实时荧光定量PCR法检测肝癌组织和癌旁正常组织中miR－7 mRNA和Raf1 mRNA的表达，分析miR－7 mRNA的表达与肝癌患者临床病理特征的关系。将肝癌HepG2细胞分为空白对照组、miR－7阴性对照组和miR－7模拟物转染组，采用脂质体转染技术将miR－7模拟物和阴性对照瞬时转染HepG2细胞，以实时荧光定量PCR法检测miR－7 mRNA的表达，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同时间点各组细胞的增殖活性，采用Transwell侵袭实验检测各组侵袭细胞数目。通过TargetScan在线预测miR－7作用的靶基因，采用荧光素酶报告基因实验验证miR－7对预测靶基因Raf1的3′非翻译区的靶向作用。采用Western blot法检测肝癌组织、相邻正常组织和各组细胞中Raf1蛋白的表达。采用Pearson法分析miR－7 mRNA与Raf1 mRNA表达的相关性。
结果肝癌组织和相邻正常组织中miR－7 mRNA的相对表达水平分别为0.49±0.02和1.21±0.05，差异有统计学意义(P<0.01)；miR－7 mRNA的表达水平与肿瘤大小、是否转移和预后有关(均P<0.05)。miR－7模拟物转染组HepG2细胞中miR－7 mRNA的相对表达量为12.67±0.40，明显高于空白对照组(0.49±0.01，P<0.01)。与空白对照组比较，转染48和72 h时，miR－7模拟物转染组的吸光度明显降低(P<0.01)，侵袭细胞数目明显减少(P<0.01)，野生型Raf1报告基因的荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。肝癌组织和相邻正常组织中Raf1蛋白的相对表达量分别为3.15±0.10和0.53±0.03，差异有统计学意义(P<0.01)。miR－7阴性对照组和miR－7模拟物转染组HepG2细胞中Raf1蛋白的相对表达量分别为0.98±0.02和0.24±0.01，差异有统计学意义(P<0.01)；肝癌组织中miR－7与Raf1的表达呈负相关(P<0.05)。
结论miR－7在肝癌组织中的表达明显降低，与肝癌患者的较差预后相关；miR－7能通过调控Raf1基因的表达抑制肝癌HepG2细胞的体外增殖和侵袭能力。