【摘 要】
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筛选间隙连接蛋白31(connexin31,Cx31)相互作用蛋白并研究其在Cx31运输中的功能.运用制备的抗Cx31多克隆抗体免疫沉淀,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,蛋白质条带回收,蛋白质胶
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筛选间隙连接蛋白31(connexin31,Cx31)相互作用蛋白并研究其在Cx31运输中的功能.运用制备的抗Cx31多克隆抗体免疫沉淀,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,蛋白质条带回收,蛋白质胶块酶解,电喷雾-四极杆-飞行时间质谱分析,数据库扫描筛选可能相互作用蛋白,可能互作蛋白经免疫共沉淀、细胞免疫共定位等证实,确定actin为Cx31相互作用蛋白.用药物处理细胞,抑制actin的功能,观察Cx31定位与间隙连接通道的通透性,确定actin在Cx31运输中的功能.当药物抑制actin的功能时,Cx31很少能到达细胞膜上形成间隙连接通道,Cx3l主要分布在胞质中;当药物抑制tublin的功能时,Cx31能到达细胞膜上形成间隙连接通道,细胞免疫荧光实验显示间隙连接斑有增多的现象,但染料转移实验表明细胞膜上间隙连接通道并没有增加.Actin在Cx31运输至细胞膜上形成间隙连接通道的过程中具有重要作用.
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