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遗传学编码的光激活近红外荧光蛋白PAiRFP1是近年来活体成像领域中的一个非常有潜力的荧光标记蛋白,发射峰在720 nm左右,可有效提高成像的信噪比。为了实现多色成像,采用PCR定点突变,将GAF结构域中第247位异亮基酸(Ile)突变为半胱氨酸(Cys),该Cys残基在其他相关荧光蛋白中对于光谱的蓝移发挥了重要作用。通过蛋白质工程、体外BV组装、以及光谱学检测发现:该Cys残基的引入对于PAiRFP1近红外荧光发射最大峰位置并未产生显著影响,但却降低了摩尔消光系数、荧光量子产率等参数。Pymol分析显示