【摘 要】
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以PRRSV FJ-1a株为模板,采用RT-PCR法分别扩增出GP2a/GP2b-3、GP3、GP4、GP5和M蛋白基因片段,双酶切后插入穿梭质粒pDC316。利用AdMaxTM法,将5个重组穿梭质粒分别与腺病毒辅
【机 构】
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福建省农业科学院生物技术研究所,福建省畜禽疫病防治工程技术中心
【基金项目】
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福建省科技重大专项(2006NZ0003-2)
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以PRRSV FJ-1a株为模板,采用RT-PCR法分别扩增出GP2a/GP2b-3、GP3、GP4、GP5和M蛋白基因片段,双酶切后插入穿梭质粒pDC316。利用AdMaxTM法,将5个重组穿梭质粒分别与腺病毒辅助质粒共转染293细胞,得到重组腺病毒Ad-GP2a/GP2b-3、Ad-GP3、Ad-GP4、Ad-GP5和Ad-M。重组腺病毒滴度为107.7~109.0TCID50.mL-1,而以Ad-GP5滴度最低,仅为107.7TCID50.mL-1。PCR检测第3、6、9代重组腺病毒稳定性,确证重组病毒均能稳定携带目的基因。对目的基因转录的RT-PCR鉴定结果显示,重组腺病毒分别感染293细胞后能转录产生目的基因mRNA。表达PRRSV主要囊膜蛋白基因重组腺病毒的获得,为进一步研制PRRSV基因工程疫苗,解析主要囊膜蛋白功能奠定基础。
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