【摘 要】
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目的:构建pDC515-nr2B重组质粒, 并研究其在体外表达及体内的免疫效应.方法:根据本研究前期从噬菌体随机12肽库中筛选出的NR2B(N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基)表位DNA序列,
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室
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目的:构建pDC515-nr2B重组质粒, 并研究其在体外表达及体内的免疫效应.方法:根据本研究前期从噬菌体随机12肽库中筛选出的NR2B(N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基)表位DNA序列, 合成两条部分互补的DNA单链, 用PCR法合成NR2B表位DNA片段.将NR2B表位编码基因克隆入真核高效表达载体pDC515中, 构建pDC515-nr2B重组质粒, 经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切和DNA测序鉴定其正确性.在293fectinTM 介导下将pDC515-nr2B体外转染293细胞后, 经RT-PCR及免疫细胞化学染色法鉴定目的基因的表达.将10只SD大鼠随机分为实验组和对照组, 实验组用100 μg的 pDC515-nr 2B免疫, 0 d及7 d各肌注1次, 对照组于相同时间注射相同剂量的空质粒pDC515.免疫后14 d, 检测大鼠血清中抗NR2B抗体的水平.结果:正确构建了pDC515-nr2B重组质粒.以其转染293细胞后, 在转染的293细胞中用RT-PCR可检测到NR2B的mRNA, 用免疫细胞化学染色法检测其胞质染色呈阳性.实验组大鼠的血清中可检测到抗NR2B抗体.结论:成功地构建pDC515-nr2B重组质粒并可诱导SD大鼠产生相应的抗体.
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