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目的
评价抗凋亡基因bcl-XL对视网膜光感受器细胞的抗凋亡作用。
方法首先建立谷氨酸损伤的SD大鼠视网膜光感受器细胞凋亡模型。将体外培养的光感受器细胞分为A组(正常对照组)、B组(谷氨酸组)及C组(rAd-gfp-bcl-XL转染+谷氨酸组);其中C组在加入谷氨酸前48h用滴度为6.5×1012pfu/mL的重组腺病毒rAd-gfp-bcl-XL转染光感受器细胞;荧光显微镜下观察光感受器细胞中的绿色荧光蛋白表达情况;用免疫组化法分析rAd-gfp-bcl-XL转染细胞和未转染细胞Bcl-XL蛋白水平;DNA琼脂糖凝胶电泳以评判3个组神经元凋亡发生与否及凋亡程度;采用Hoechst33258染色做正常核和凋亡核的形态学检测。
结果免疫组化检测结果表明转染细胞与未转染细胞的Bcl-XL蛋白表达水平有差异,DNA电泳分析发现B组呈典型的DNA“梯度”条带,而A组和C组几乎无DNA“梯度”条带,核形态学检测结果亦证实转染组较未转染组的核有明显差异。
结论重组腺病毒介导转染的bcl-XL对体外培养的视网膜光感受器细胞有抗凋亡作用,提高视网膜光感受器细胞bcl-XL的表达水平可能为视网膜变性疾病提供潜在有效的治疗方法。