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【关键词】 枇杷清肺颗粒；质量标准
文章编号：1004-7484（2013）-02-0898-02
六安市中医院制剂枇杷清肺颗粒，以枇杷清肺饮加减，功在养阴清热，化痰散结。枇杷叶、桑白皮、北沙参，入肺胃经，性寒，清肺胃之热力强，又兼养肺阴，共为君药以养阴清热；知母养阴润燥、生地凉血养阴、女贞子滋阴、赤芍滋阴清热凉血解毒，共助君药养阴清热为臣；丹参活血养阴、蒲公英，金银花清热解毒，软坚散结、虎杖化痰祛湿热，共为佐药以清热解毒，软坚散结；甘草性甘，即可调和诸药，又可顾护脾胃，本身尚有清热解毒之效，故为佐使药。组方合理，既符合中医辨证施治思维，又有现代药物试验基础，适于各种类型痤疮的治疗。本实验对枇杷清肺颗粒中的组方药材甘草、赤芍建立了专属性强的薄层鉴别方法，对赤芍的主要有效成分芍药苷进行了定量控制，建立了枇杷清肺颗粒的质量控制方法。
1 仪器与试药
Agilent1200高效液相色谱仪（自动进样系统），紫外检测器，Sartorius BT125D电子天平，KQ5200DA超声仪，CAMAG紫外观察箱，YOKO-XR薄层加热器芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，110736-201035），甘草对照药材（中国药品生物制品检定所，120904-201117），甲醇（色谱纯），水为双重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 甘草的薄层鉴别 取本品5g，研细，加甲醇60ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（40：10：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的淡黄色斑点。缺味甘草对照试验未见干扰，方法专属性强。
2.2 赤芍的薄层鉴别 取本品5g，研细，加乙醇30ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各3-5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。缺味赤芍对照试验未见干扰，方法专属性强。
2.3 HPLC测定芍药苷
2.3.1 色谱条件 色谱柱：辛基硅烷键合硅胶柱Lichrospher C8，4.6×250mm，5um；流动相：乙腈：水（15：85）；流速：1.0mL/min；檢测波长：230nm；柱温：30℃。
2.3.2 溶液制备 取本品2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30ml，超声处理（功率300W，频率50kHz）30分钟，滤过，滤液取20ml浓缩至2ml，放冷，过中性氧化铝柱（5g，100-200目），用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至50ml，用0.45μm的滤膜滤过，即得。
2.3.3 方法学考察
2.3.3.1 阴性干扰试验 吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液各10μL，按上述色谱条件测定。结果供试品溶液与对照品溶液在相同时间处有相同的色谱峰出现，阴性对照品溶液无干扰。
2.3.3.2 线性关系的考察 精密称取芍药苷对照品8.12mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml分别至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按含量测定项下的方法进行测定，以峰面积（S）对浓度（C）做线性回归，得回归方程y=49036x-237281，R2=0.9994结果表明：芍药苷浓度范围在32.48μg/ml-162.40μg/ml之间峰面积（y）与浓度（x）线性关系良好。
2.3.3.3 稳定性试验 取本品适量，照含量测定项下方法处理，按高效液相色谱法（中国药典2010版一部附录ⅥD）在230nm处测定，结果表明在12小时以内被测样品溶液基本稳定，见表1。
3 讨论
本实验在对方中药材进行定性鉴别的过程中，分别对方中其他各味药材进行了摸索，经过多次鉴别试验研究，但最终未能达到符合要求的结果，故未列入质量标准正文中。选择甘草、赤芍作为质量控制中的定性标准，重复性好，隐阴性无干扰。芍药苷含量测定过程中，在对提取溶剂的选择时，曾分别比较了100%甲醇、50%甲醇及50%乙醇，发现用50%甲醇提取，提取较完全，且杂质较少，利于检测。
文章编号：1004-7484（2013）-02-0898-02
六安市中医院制剂枇杷清肺颗粒，以枇杷清肺饮加减，功在养阴清热，化痰散结。枇杷叶、桑白皮、北沙参，入肺胃经，性寒，清肺胃之热力强，又兼养肺阴，共为君药以养阴清热；知母养阴润燥、生地凉血养阴、女贞子滋阴、赤芍滋阴清热凉血解毒，共助君药养阴清热为臣；丹参活血养阴、蒲公英，金银花清热解毒，软坚散结、虎杖化痰祛湿热，共为佐药以清热解毒，软坚散结；甘草性甘，即可调和诸药，又可顾护脾胃，本身尚有清热解毒之效，故为佐使药。组方合理，既符合中医辨证施治思维，又有现代药物试验基础，适于各种类型痤疮的治疗。本实验对枇杷清肺颗粒中的组方药材甘草、赤芍建立了专属性强的薄层鉴别方法，对赤芍的主要有效成分芍药苷进行了定量控制，建立了枇杷清肺颗粒的质量控制方法。
1 仪器与试药
Agilent1200高效液相色谱仪（自动进样系统），紫外检测器，Sartorius BT125D电子天平，KQ5200DA超声仪，CAMAG紫外观察箱，YOKO-XR薄层加热器芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，110736-201035），甘草对照药材（中国药品生物制品检定所，120904-201117），甲醇（色谱纯），水为双重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 甘草的薄层鉴别 取本品5g，研细，加甲醇60ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（40：10：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的淡黄色斑点。缺味甘草对照试验未见干扰，方法专属性强。
2.2 赤芍的薄层鉴别 取本品5g，研细，加乙醇30ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各3-5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。缺味赤芍对照试验未见干扰，方法专属性强。
2.3 HPLC测定芍药苷
2.3.1 色谱条件 色谱柱：辛基硅烷键合硅胶柱Lichrospher C8，4.6×250mm，5um；流动相：乙腈：水（15：85）；流速：1.0mL/min；檢测波长：230nm；柱温：30℃。
2.3.2 溶液制备 取本品2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30ml，超声处理（功率300W，频率50kHz）30分钟，滤过，滤液取20ml浓缩至2ml，放冷，过中性氧化铝柱（5g，100-200目），用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至50ml，用0.45μm的滤膜滤过，即得。
2.3.3 方法学考察
2.3.3.1 阴性干扰试验 吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液各10μL，按上述色谱条件测定。结果供试品溶液与对照品溶液在相同时间处有相同的色谱峰出现，阴性对照品溶液无干扰。
2.3.3.2 线性关系的考察 精密称取芍药苷对照品8.12mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml分别至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按含量测定项下的方法进行测定，以峰面积（S）对浓度（C）做线性回归，得回归方程y=49036x-237281，R2=0.9994结果表明：芍药苷浓度范围在32.48μg/ml-162.40μg/ml之间峰面积（y）与浓度（x）线性关系良好。
2.3.3.3 稳定性试验 取本品适量，照含量测定项下方法处理，按高效液相色谱法（中国药典2010版一部附录ⅥD）在230nm处测定，结果表明在12小时以内被测样品溶液基本稳定，见表1。
3 讨论
本实验在对方中药材进行定性鉴别的过程中，分别对方中其他各味药材进行了摸索，经过多次鉴别试验研究，但最终未能达到符合要求的结果，故未列入质量标准正文中。选择甘草、赤芍作为质量控制中的定性标准，重复性好，隐阴性无干扰。芍药苷含量测定过程中，在对提取溶剂的选择时，曾分别比较了100%甲醇、50%甲醇及50%乙醇，发现用50%甲醇提取，提取较完全，且杂质较少，利于检测。