【摘 要】
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本研究参考大肠杆菌密码子的偏好性,对GenBank中已经发表的鸭α-干扰素基因序列进行优化,人工合成后与原核表达载体pET30a-ELP连接,构建原核表达质粒pET30a-DuIFNα-ELP。将
【机 构】
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江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,南京师范大学生命科学学院
【基金项目】
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江苏省高等学校自然科学研究重大项目(19KJA520008),江苏农牧科技职业学院横向配套课题(NSFPT201710),2017年省高校协同创新中心立项课题(NSFKF201705),江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(18)1004]
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本研究参考大肠杆菌密码子的偏好性,对GenBank中已经发表的鸭α-干扰素基因序列进行优化,人工合成后与原核表达载体pET30a-ELP连接,构建原核表达质粒pET30a-DuIFNα-ELP。将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达重组蛋白DuIFNα-ELP。根据类弹性蛋白多肽(ELP)具有温度敏感的可逆相变特性,通过重复可逆相变循环(ITC)纯化重组蛋白质;纯化的蛋白质主要以包涵体的形式存在,通过变性、复性处理后,采用细胞病变抑制法分别在MDCK/VSV和DEF/VSV中检
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