抑制PTEN蛋白对抑制性微环境中神经元生长的影响

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目的 观察抑癌分子磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)抑制剂bpv(pic)对抑制性微环境中神经元生长的影响,并探讨其可能的机制.方法 进行胎鼠皮层神经元的原代培养,以成年大鼠脑髓鞘膜蛋白作为细胞培养的抑制性底物.取培养后细胞分为3组:(1)正常对照组:常规培养,不做特殊处理;(2)抑制对照组:培养孔玻片用髓鞘膜蛋白包被;(3)bpv(pic)处理组:髓鞘膜蛋白包被培养孔,培养液中含200 nmol/L bpv(pic).分别于接种后24h、48 h、72 h、5d行实时定量PCR(RT-PCR)检测及免疫荧光染色,观察各组PTEN和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因表达情况及各组神经元突起生长情况.结果 免疫荧光结果显示,4个时间点各组间细胞轴突长度差异均有统计学意义(P<0.05);在培养早期(24 h、48 h、72 h),正常对照组细胞轴突最长;到后期(5 d),bpv(pic)处理组细胞轴突最长.PT-PCR结果显示:3组细胞mTOR及PTEN在4个时间点之间表达量基本稳定,差异均无统计学意义(P>0.05).同一时间点不同组别细胞间mTOR及PTEN表达量差异有统计学意义(P<0.05),其中bpv(pic)处理组mTOR及PTEN表达量均明显高于正常对照组与抑制对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 抑癌基因PTEN的作用受到阻抑后,抑制性微环境中神经元的生长状况得到改善,可能与磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3)/丝-苏氨酸蛋白激酶(Akt)/mTOR通路的活化有关。

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