GST-UCP2-N和GST-UCP2-C原核表达载体的构建表达及多克隆抗体的制备

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【摘要】

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以pMD18-T-hucp2为模板，用设计的两对特异性的引物PCR得到hucp2cDNAN端和C端的两断基因片段，然后将其插入到pGEX5x1表达载体上，重组质粒在PCR、双酶切、测序鉴定后，经IPTG诱导，在

【作者】

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白蕊郭亚楠卞桢刘丹青曾科

【机构】

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南京大学生物化学与分子生物学系

【出处】

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南京大学学报：自然科学版

【发表日期】

：

2010年2期

【关键词】

：

解偶联蛋白2(UCP2) 表达多克隆抗体 uncoupling protein 2 （UCP2） expression polyclonal antibo

【基金项目】

：

国家自然科学基金（30871019）

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以pMD18-T-hucp2为模板，用设计的两对特异性的引物PCR得到hucp2cDNAN端和C端的两断基因片段，然后将其插入到pGEX5x1表达载体上，重组质粒在PCR、双酶切、测序鉴定后，经IPTG诱导，在大肠杆菌BL21表达大量融合蛋白GST-UCP2-N（C），经GST亲和层析纯化蛋白．以该蛋白为抗原免疫ucp2基因敲除小鼠，western blot鉴定血清中抗体的反应性．实验证明成功构建了构建pGEX-5X-1-UCPN（c）重组质粒，表达出了融合蛋白．并获得了抗血清．为进一步获得灵敏性更高，特

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