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【中图分类号】R242【文献标识码】A【文章编号】1632-5281（2015）7
[摘要] 目的： 提高翁沥通胶囊的质量标准，建立翁沥通胶囊中贝母素乙的含量测定方法。方法： 采用Agilent TC-C18 （4.6mm×150mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.1%三乙胺溶液（65：35），ELSD参数：漂移管温度：85℃ ，载气流量：2.3L·min-1。结果： 采用该方法测定贝母素乙的线性范围为0.779-7.792μg，贝母素乙的回归方程为：Y=1.4466x+1.5056，r=0.997，平均回收率是96.42%，RSD=1.1%，精密度、稳定性、重复性良好。结论： 该方法简便易行，准确性高，结果可靠，能准确反映出翁沥通胶囊的质量，为提高翁沥通胶囊质量标准提供了依据。
[关键词]： HPLC-ELSD； 贝母素乙；含量测定
翁沥通胶囊是由薏苡仁、浙贝母、栀子、金银花等中药组成的复方制剂，具有清热利湿，散结去瘀的功效。用于证属湿热雍结，痰瘀交阻之前列腺增生症[1]。本品为国家食品药品监督管理局标准，该标准中采用薄层扫描法测定贝母素乙的含量，该法灵敏度较低，精密度和重现性极差[2]。为了更好的控制翁沥通胶囊制剂的质量，笔者采用HPLC-ELSD法[3]，建立了准确度较好的定量方法，该方法为为翁沥通胶囊标准修订提供了理论依据。
1 材料
药品、试剂与仪器
Waters2695高效液相色谱仪；Waters2424 ELSD检测器；XP26电子分析天平；贝母素乙对照品（批号：110751-200709，含量：99.8%，中国药品生物制品所）；乙腈（色谱纯，批号：12090076，Tedia Company， Inc）；其他试剂均为分析纯；翁沥通胶囊5批，华威药业有限公司生产。
2 方法和结果
2.1色谱条件
色谱柱为Agilent TC-C18 （4.6mm×150mm，5μm），流动相：乙腈-0.3%二乙胺水（65：35），流速为1.0 mL·min-1，柱温为30 ℃，ELSD检测器：漂移管温度85℃，载气压力0.33 MPa。分离结果见图1。
A 对照品 B供试品
图1 翁沥通胶囊供试品和贝母素乙对照品HPLC-ELSD色谱图
2.2 对照品溶液
精密称取贝母素乙对照品19.52mg置25ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得贝母素乙对照品储备液。精密吸取上述储备液5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
2.3 供试品溶液[4]
取供试品10粒，取出内容物混匀，精密称定，取内容物约2.5g，精密称定，置烧瓶中，加浓氨试液5ml浸润1小时，精密加入三氯甲烷-甲醇（4：1）的混合溶液40ml，称定重量，混匀，置80℃水浴中加热回流1小时，放冷，再称定重量，加上述混合溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液10ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系的考察
分别精密吸取上述对照品储备液1.0ml、2ml、3ml、5ml、7ml、10ml置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图峰面积，以贝母素乙峰面积的对数值为纵坐标，对照品质量（ng）的对数值为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，贝母素乙的回归方程为：Y=1.4466x+1.5056，r=0.997，贝母素乙在0.779-7.792μg内呈良好的线性关系。
2.5 重复性试验
分别精密称取同一批样品（批号150101）6份，按上述含量测定项方法进行5次平行试验，结果表明本法重复性较好贝母素乙（0.35mg/粒）的RSD为2.08%
2.6 精密度试验
取同一样品溶液，测定6次，以贝母素乙峰面积计算，贝母素乙的RSD为1.98%。
2.7 稳定性
取同一样品溶液，在室温下分别放置0、2、4、6、12、24h时分别进样，测定翁沥通胶囊中贝母素乙的含量， RSD为2.10%，结果表明贝母素乙在24h内稳定。
2.8 回收率
按上述测定方法，精密称取已知含量的翁沥通胶囊内容物，分别加入对照品母液0.5ml，按照色谱条件测定，计算回收率，结果表明本法具有良好的准确性。
2.9样品测定
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述HPLC-ELSD条件进行分析测定，用外标两点法对数方程计算贝母素乙的含量，结果见下表。
本实验考察了乙腈-0.3%二乙胺水溶液在70：30、65：35、60：40三个比例下的色谱条件，70：30条件下贝母素乙分离度不合格，其余两种比例流动相条件下分离度均可达到要求，虽然60：40条件下分离度更好，但是分析时间会延长，流动相中水的比例较其他两种高，基线噪音会偏大，综合考虑选择乙腈-0.3%二乙胺水溶液（65：35）作为最终流动相。
考察了色谱柱温度在30℃、35℃、40℃下的條件，三种温度下出峰时间和峰形略有变化，影响不大，因此选择接近常温的30℃作为色谱柱温度。
此方法的最大优点是准确性高，结果可靠，能准确反反映出翁沥通胶囊的质量，较原标准来说能更加准确的控制翁沥通胶囊的质量，该实验可以为药典收载翁沥通胶囊质量标准提供了依据。
参考文献
[1] 国家食品药品监督管理局标准YBZ09432004.
[2] 张浩，李成网.HPLC-ELSD法测定皖贝止咳胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量[J].中国实验方剂学杂志，2009，5（15）：4-5.
[3] 韩静等.HPLC-ELSD法同时测定平贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量[J]. 中国药师， 2009， 12（5）：595.
[4] 姜艳，李萍.HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量[J].中国药学杂志，2005，8：1257.
作者简介：贲彦鸿（1978～），女，汉族，主管中药师， 硕士研究生，研究方向：复方中药有效成分及分子药理学研究.
[摘要] 目的： 提高翁沥通胶囊的质量标准，建立翁沥通胶囊中贝母素乙的含量测定方法。方法： 采用Agilent TC-C18 （4.6mm×150mm，5μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.1%三乙胺溶液（65：35），ELSD参数：漂移管温度：85℃ ，载气流量：2.3L·min-1。结果： 采用该方法测定贝母素乙的线性范围为0.779-7.792μg，贝母素乙的回归方程为：Y=1.4466x+1.5056，r=0.997，平均回收率是96.42%，RSD=1.1%，精密度、稳定性、重复性良好。结论： 该方法简便易行，准确性高，结果可靠，能准确反映出翁沥通胶囊的质量，为提高翁沥通胶囊质量标准提供了依据。
[关键词]： HPLC-ELSD； 贝母素乙；含量测定
翁沥通胶囊是由薏苡仁、浙贝母、栀子、金银花等中药组成的复方制剂，具有清热利湿，散结去瘀的功效。用于证属湿热雍结，痰瘀交阻之前列腺增生症[1]。本品为国家食品药品监督管理局标准，该标准中采用薄层扫描法测定贝母素乙的含量，该法灵敏度较低，精密度和重现性极差[2]。为了更好的控制翁沥通胶囊制剂的质量，笔者采用HPLC-ELSD法[3]，建立了准确度较好的定量方法，该方法为为翁沥通胶囊标准修订提供了理论依据。
1 材料
药品、试剂与仪器
Waters2695高效液相色谱仪；Waters2424 ELSD检测器；XP26电子分析天平；贝母素乙对照品（批号：110751-200709，含量：99.8%，中国药品生物制品所）；乙腈（色谱纯，批号：12090076，Tedia Company， Inc）；其他试剂均为分析纯；翁沥通胶囊5批，华威药业有限公司生产。
2 方法和结果
2.1色谱条件
色谱柱为Agilent TC-C18 （4.6mm×150mm，5μm），流动相：乙腈-0.3%二乙胺水（65：35），流速为1.0 mL·min-1，柱温为30 ℃，ELSD检测器：漂移管温度85℃，载气压力0.33 MPa。分离结果见图1。
A 对照品 B供试品
图1 翁沥通胶囊供试品和贝母素乙对照品HPLC-ELSD色谱图
2.2 对照品溶液
精密称取贝母素乙对照品19.52mg置25ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得贝母素乙对照品储备液。精密吸取上述储备液5ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
2.3 供试品溶液[4]
取供试品10粒，取出内容物混匀，精密称定，取内容物约2.5g，精密称定，置烧瓶中，加浓氨试液5ml浸润1小时，精密加入三氯甲烷-甲醇（4：1）的混合溶液40ml，称定重量，混匀，置80℃水浴中加热回流1小时，放冷，再称定重量，加上述混合溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液10ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 线性关系的考察
分别精密吸取上述对照品储备液1.0ml、2ml、3ml、5ml、7ml、10ml置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图峰面积，以贝母素乙峰面积的对数值为纵坐标，对照品质量（ng）的对数值为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，贝母素乙的回归方程为：Y=1.4466x+1.5056，r=0.997，贝母素乙在0.779-7.792μg内呈良好的线性关系。
2.5 重复性试验
分别精密称取同一批样品（批号150101）6份，按上述含量测定项方法进行5次平行试验，结果表明本法重复性较好贝母素乙（0.35mg/粒）的RSD为2.08%
2.6 精密度试验
取同一样品溶液，测定6次，以贝母素乙峰面积计算，贝母素乙的RSD为1.98%。
2.7 稳定性
取同一样品溶液，在室温下分别放置0、2、4、6、12、24h时分别进样，测定翁沥通胶囊中贝母素乙的含量， RSD为2.10%，结果表明贝母素乙在24h内稳定。
2.8 回收率
按上述测定方法，精密称取已知含量的翁沥通胶囊内容物，分别加入对照品母液0.5ml，按照色谱条件测定，计算回收率，结果表明本法具有良好的准确性。
2.9样品测定
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述HPLC-ELSD条件进行分析测定，用外标两点法对数方程计算贝母素乙的含量，结果见下表。
本实验考察了乙腈-0.3%二乙胺水溶液在70：30、65：35、60：40三个比例下的色谱条件，70：30条件下贝母素乙分离度不合格，其余两种比例流动相条件下分离度均可达到要求，虽然60：40条件下分离度更好，但是分析时间会延长，流动相中水的比例较其他两种高，基线噪音会偏大，综合考虑选择乙腈-0.3%二乙胺水溶液（65：35）作为最终流动相。
考察了色谱柱温度在30℃、35℃、40℃下的條件，三种温度下出峰时间和峰形略有变化，影响不大，因此选择接近常温的30℃作为色谱柱温度。
此方法的最大优点是准确性高，结果可靠，能准确反反映出翁沥通胶囊的质量，较原标准来说能更加准确的控制翁沥通胶囊的质量，该实验可以为药典收载翁沥通胶囊质量标准提供了依据。
参考文献
[1] 国家食品药品监督管理局标准YBZ09432004.
[2] 张浩，李成网.HPLC-ELSD法测定皖贝止咳胶囊中贝母素甲和贝母素乙的含量[J].中国实验方剂学杂志，2009，5（15）：4-5.
[3] 韩静等.HPLC-ELSD法同时测定平贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量[J]. 中国药师， 2009， 12（5）：595.
[4] 姜艳，李萍.HPLC-ELSD测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量[J].中国药学杂志，2005，8：1257.
作者简介：贲彦鸿（1978～），女，汉族，主管中药师， 硕士研究生，研究方向：复方中药有效成分及分子药理学研究.