【摘 要】
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目的:探讨银杏酮酯(Ginkgo biloba extract,GBE50)抗过氧化氢(H2O2)诱导大鼠衰老海马神经元氧化DNA损伤的作用及人类长寿基因(Silent information regulator 1,SIRT1)在其中
【机 构】
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河南中医学院基础医学院,上海中医药大学基础医学院,上海杏灵科技药业有限公司,
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目的:探讨银杏酮酯(Ginkgo biloba extract,GBE50)抗过氧化氢(H2O2)诱导大鼠衰老海马神经元氧化DNA损伤的作用及人类长寿基因(Silent information regulator 1,SIRT1)在其中的作用机制。方法:培养、鉴定大鼠原代海马神经元。将细胞随机分为4组,正常对照组,H2O2模型组,银杏酮酯组和阳性对照银杏叶提取物(EGB761)组。正常对照组用培养基24小时,模型组用H2O2(200μM)诱导18小时建立细胞衰老样模型,后两组分别用200μg/ml的银杏酮酯和银杏叶提取物预处理6小时后再加入H2O2诱导18小时。细胞免疫荧光方法观察各组神经元中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)和SIRT1的表达强度;免疫印迹方法检测SIRTl、p53和p21的蛋白水平。结果:光镜下观察培养6~7天时海马神经元逐渐成熟,免疫荧光鉴定神经元纯度达到90%以上。细胞免疫荧光结果显示:与正常对照组相比,H2O2诱导的大鼠原代衰老海马神经元中8-OHDG表达增加(P<0.01),SIRT1的表达降低(P<0.01)。200μg/ml银杏酮酯和阳性对照银杏叶提取物预处理后8-OHDG表达减少(P<0.05),SIRT1的表达增加(P<0.05)。免疫印迹结果显示:与正常对照组相比,H2O2诱导的大鼠原代衰老海马神经元中SIRTl蛋白表达下降,p21蛋白表达增加(P﹤0.05);200μg/ml银杏酮酯和阳性对照银杏叶提取物预处理后H2O2诱导的海马神经元SIRTl蛋白表达增加(P<0.05),p21蛋白表达下降(P<0.05);而p53蛋白变化不明显(P﹥0.05)。结论:200μg/ml的银杏酮酯可降低H2O2诱导的大鼠原代衰老海马神经元内8-OHDG表达,其机制可能与SIRT1、p21蛋白表达有关。
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