【摘 要】
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试验旨在获得秦川牛肉用新品系(以下简称“秦川肉牛”)具有高干扰效率的脂肪细胞分化相关蛋白2(PLIN2)基因干扰siRNA及高过表达效率的基因超表达载体,为后续研究PLIN2基因在
【机 构】
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西北农林科技大学动物科技学院,杨凌712100;陕西省动物研究所,西安710032;西北农林科技大学动物科技学院,杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院,杨凌712100;国家肉牛改良中心,杨
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试验旨在获得秦川牛肉用新品系(以下简称“秦川肉牛”)具有高干扰效率的脂肪细胞分化相关蛋白2(PLIN2)基因干扰siRNA及高过表达效率的基因超表达载体,为后续研究PLIN2基因在秦川肉牛脂肪细胞分化过程中的功能提供试验依据.通过采用siRNA介导的靶基因沉默技术合成靶向牛PLIN2 mRNA序列的si-PLIN2及构建真核pcDNA3.1 (+)-PLIN2过表达载体,利用FuGENE(R)6低毒性转染试剂配制转染复合物,转染秦川肉牛脂肪细胞并进行诱导分化.采用实时荧光定量PCR检测技术检测各试验组与对照组中PLIN2基因的相对表达量,并计算目的 基因干扰及过表达效率;采用Western blotting方法检测蛋白水平的表达情况;采用BODIPY脂滴染色的方法观察表型.结果 表明,转染秦川肉牛前体脂肪细胞后干扰组3对si-PLIN2 (si-PLIN201、si-PLIN202和si-PLIN203)与对照组(si-PLIN2-NC)相比,PLIN2基因表达量下降(P＜0.01),干扰效率分别为71％、54％和50％;蛋白水平检测发现,si-PLIN2_01、si-PLIN2_03组蛋白水平表达与对照组(si-PLIN2-NC)相比出现下降趋势;脂滴染色后发现,干扰组与对照组相比,脂滴数目明显减少.过表达组pcDNA3.1 (+)-PLIN2与对照组相比,PLIN2基因表达量显著上调,达35倍,脂滴数目明显增多.综上所述,siRNA介导的PLIN2基因沉默或pcDNA3.1(+)介导的体外表达载体均可以成功实现对PLIN2基因在秦川肉牛脂肪细胞分化过程中的干扰或超表达,并影响脂肪细胞分化过程中脂滴的形成数量.本研究为进一步探究PLIN2在秦川肉牛脂肪细胞分化过程中的功能奠定基础.
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