E2F3基因腺相关病毒干扰载体的构建

来源 :中国肿瘤临床 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wq123sd

【摘要】

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目的：构建针对E2F3基因的腺相关病毒干扰穿梭质粒载体，为进一步包装能够表达干扰序列的病毒奠定基础。方法：通过已经合成的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo干扰质粒载体，进行限制性内切酶M

【作者】

：

胡海龙韩瑞发孙岩刘利维任海林梁恩利王春阳吴长利

【机构】

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天津市泌尿外科研究所

【出处】

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中国肿瘤临床

【发表日期】

：

2009年19期

【关键词】

：

AAV系统 RNAI E2F3 AAV system RNAi E2F3

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目的：构建针对E2F3基因的腺相关病毒干扰穿梭质粒载体，为进一步包装能够表达干扰序列的病毒奠定基础。方法：通过已经合成的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo干扰质粒载体，进行限制性内切酶Mlu酶切，将干扰片段克隆入线性质粒pAAV-MCS中，构建具有表达沉默E2F3基因的RNA干扰穿梭质粒。通过BglⅡ及Mlu单酶切，BamH1和HandⅢ双酶切、PCR鉴定及基因片段序列分析验证构建是否成功。结果：pAAV-siE2F3线性化后，片段大小约6 300bp；以Mlu为两边酶切位点设计的引物对重组质粒进

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