单增李斯特菌FosX缺失突变菌的构建

来源 :西安交通大学学报:医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zz33xx
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目的构建单增李斯特菌FosX缺失型突变菌株。方法设计并合成特异性引物,PCR扩增josX基因上、下游片段DNA(1+2)和DNA(3+4).并通过酶切和连接将两条目的片段先、后克隆入载体pMADh构建F1的质粒pMAD-DNA(1+4)。随后将目的质粒电穿孔转化入感受态单增李斯特菌中.通过抗乍素压力和温度压力筛选出突变中间体,PCR鉴定阳性克隆。最后在无抗生素压力的条件下传代突变中间体,PCR扩增鉴定突变菌。用Etest法检测构建的单增李斯特菌FosX缺失突变菌及其亲代菌株的磷霉素最小抑菌浓度(MIC)。
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