骨髓间充质干细胞来源外泌体保护脓毒症相关急性肾损伤的体外研究

来源 :同济大学学报(医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:LVBIN0077
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目的 研究骨髓间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from bone mesenchymal stem cells, BMSCsExo)对脓毒症相关急性肾损伤体外模型的作用。方法 利用超速离心法提取骨髓间充质干细胞分泌的外泌体,通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析及Western印迹法鉴定外泌体。用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)处理人肾小管上皮细胞(HK-2)建立脓毒症相关急性肾损伤(sepsis-induced acute kidney injury, SAKI)细胞模型,将细胞分为对照组(CON组)、脂多糖组(LPS组)和脂多糖+外泌体组(LPS+EXO组)。CCK-8法检测各组细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用Western印迹法检测细胞凋亡相关蛋白cleaved-Caspase3、Bax和bcl2水平,采用q RT-PCR检测炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平。结果 应用LPS处理HK-2细胞成功构建了SAKI细胞模型。LPS组中,HK-2细胞经LPS(100μg/mL)处理后细胞活性和抗凋亡蛋白bcl2表达明显下降(P<0.05),而细胞凋亡率和凋亡蛋白cleaved-Caspase3、Bax表达水平显著上升(P<0.01),同时炎性指标TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达上调(P<0.01)。LPS+EXO组中,BMSCs-Exo逆转了LPS对HK-2细胞的作用,细胞活性升高、凋亡蛋白cleaved-Caspase3以及Bax下降和抗凋亡蛋白bcl2升高(P<0.05),同时还下调了炎性因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)mRNA表达水平(P<0.05)。结论 BMSCs-Exo在LPS诱导的SAKI体外模型中发挥抗炎和抗凋亡的保护作用,为未来临床利用BMSCs-Exo治疗SAKI提供理论基础。
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