观察免疫相关性血细胞减少症(IRP)患者CD4+ T细胞基因组DNA总体甲基化水平及甲基化相关调控基因的表达水平,探讨甲基化在IRP发病中的作用。
方法选取2012年12月至2013年12月天津医科大学总医院血液科确诊的30例IRP患者(15例初治患者,15例恢复患者)及15名健康对照,以免疫磁珠法分选CD4+ T细胞,应用ELISA法测定外周血CD4+ T细胞DNA总体甲基化水平;采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测CD4+ T细胞中甲基化相关调控基因:DNA甲基化转移酶(DNMT)和甲基结合蛋白(MBD)的mRNA表达水平,并进行相关性分析。
结果IRP患者外周血CD4+ T细胞DNA总体甲基化水平初治组和恢复组均明显低于对照组(3.525%±2.046%和4.790%±1.471%比10.101%±3.449%,均P<0.05);初治组DNMT3b mRNA表达水平显著低于对照组(1.332±0.785比2.077±1.059,P<0.05);初治组、恢复组MBD2 mRNA表达水平显著高于对照组(2.999±1.601和2.055±1.576比0.581±0.247,均P<0.05);初治组MBD4 mRNA表达水平显著高于对照组(2.736±2.719比1.167±1.006,P<0.05)。IRP患者外周血CD4+ T细胞DNMT3b mRNA表达水平与DNA总体甲基化水平呈正相关(r= 0.569,P<0.01);MBD2 mRNA表达水平与CD4+ T细胞基因组DNA甲基化水平和Th1/Th2水平均呈负相关(r=-0.763,P<0.01;r=-0.652,P<0.05)。CD4+ T细胞甲基化水平与CD5+B细胞比例呈负相关(r=-0.439,P<0.05)。
结论IRP患者外周血CD4+ T细胞基因组DNA低甲基化和甲基化相关调控基因表达异常可能与IRP发病有关。