[目的]克隆龙眼MYB-related基因家族中MYB14基因,并对其进行生物信息学分析和基因表达载体的构建,为进一步研究该基因的生物学功能提供基础数据.[方法]通过转录组测序及生物信息学分析得到龙眼MYB14基因全长序列,进一步设计特异引物对其开放阅读框(ORF)全长序列进行克隆和生物信息学分析,同时构建超表达载体.[结果]MYB14基因属于MYB-related家族的TBP-like亚家族,ORF长度831 bp,编码276个氨基酸,有一个MYB结合位点.该蛋白属于非跨膜亲水蛋白,亚细胞定位预测定位于细胞质,存在57个氨基酸磷酸化位点.其二级结构主要由无规则卷曲以及 α-螺旋构成,二级结构与三级结构预测结果高度一致,同源基因进化树分析表明该基因与大麻亲缘关系最近,同时成功构建了植物超表达载体pBI121-MYB14.[结论]本研究克隆得到了龙眼MYB14基因,成功构建表达载体pBI121-MYB14,为该基因功能的研究奠定了坚实的基础.