【摘 要】
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在小鼠1-细胞期受精卵,蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)可通过磷酸化细胞分裂周期25B(cell division cycle25B,CDC25B)的321位Ser引起受精卵分裂阻滞。本文旨在研究PKA对CDC
【机 构】
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中国医科大学生物化学与分子生物学教研室; 辽宁医学院生物化学与分子生物学教研室;
【基金项目】
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supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81070489)
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在小鼠1-细胞期受精卵,蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)可通过磷酸化细胞分裂周期25B(cell division cycle25B,CDC25B)的321位Ser引起受精卵分裂阻滞。本文旨在研究PKA对CDC25B149位点Ser的磷酸化对小鼠受精卵发育的影响,及其与321位点的关系。质粒pBSK-CDC25B-WT(野生型)、pBSK-CDC25B-S149A(149位Ser突变成Ala)、pBSK-CDC25B-S321A(321位Ser突变成Ala)、pBSK-CDC25B-S149A/S321A(149位和321位Ser联合突变成Ala)体外转录成mRNAs;显微注射入小鼠S期受精卵中,在PKA抑制剂H-89预处理的M16培养基中培养,观察其对受精卵发育、有丝分裂成熟促进因子(matu-ration promoting factor,MPF)活性及CDC2-Tyr15磷酸化状态的影响。结果显示,H-89呈剂量(0~50μmol/L)依赖性的方式加速小鼠受精卵卵裂。然后选择卵裂率接近100%、H-89(40μmol/L)培养的小鼠受精卵,与对照组相比,CDC25B各种mRNAs注射组受精卵卵裂率明显增高,MPF活性提前达到高峰;CDC2-Tyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致,以上结果说明,CDC25B蛋白的149位Ser也是PKA在体内调控CDC25B的重要靶点。因此在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠CDC25B蛋白S149位点与S321位点的磷酸化修饰可能是控制受精卵G2/M转换的重要方式。
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