【摘 要】
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【目的】制备鸡干扰素诱导蛋白含三角形四肽重复5（IFIT5）多克隆抗体，以探究IFIT5对J型禽白血病病毒（ALV-J）在鸡胚成纤维细胞（DF-1）内复制的影响。【方法】以感染ALV-J的鸡脾脏组织细胞提取的RNA反转录获得的cDNA作为模板，对IFIT5基因进行PCR扩增，利用重组酶将纯化后的PCR产物和线性化载体进行连接，构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT
【基金项目】
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国家自然科学基金（31972646）；
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【目的】制备鸡干扰素诱导蛋白含三角形四肽重复5（IFIT5）多克隆抗体，以探究IFIT5对J型禽白血病病毒（ALV-J）在鸡胚成纤维细胞（DF-1）内复制的影响。【方法】以感染ALV-J的鸡脾脏组织细胞提取的RNA反转录获得的cDNA作为模板，对IFIT5基因进行PCR扩增，利用重组酶将纯化后的PCR产物和线性化载体进行连接，构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT5并测序。将测序正确的重组质粒pET-28a-IFIT5转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达，表达的融合蛋白His-IFIT5纯化后免疫6周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体，通过Western blotting鉴定抗体的特异性，利用间接ELISA测定抗体的效价。将测序正确的重组质粒pcDNA5-flag-IFIT5转染DF-1细胞，24 h后接种ALV-J,通过Western blotting检测DF-1细胞中过表达IFIT5对ALV-J复制的影响。【结果】试验成功扩增到大小为1 440 bp的IFIT5基因，并成功构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT5。pET-28a-IFIT5可以表达约56 ku的可溶性蛋白His-IFIT5,Western blotting结果显示，制备的鼠抗IFIT5蛋白多克隆抗体能特异性识别DF-1细胞中过表达的IFIT5蛋白，效价为1∶32 000。pcDNA5-flag-IFIT5能在DF-1细胞中高效表达，且在DF-1细胞中过表达IFIT5可以促进ALV-J复制。【结论】本研究制备的鼠抗IFIT5蛋白多克隆抗体具有较高的反应性和特异性；在DF-1细胞中过表达IFIT5可以促进ALV-J复制。本试验结果为深入研究IFIT5蛋白的生物学功能提供参考。
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