维吾尔族妇女宫颈病变组织中HPV感染与低相对分子质量蛋白酶体2和7基因启动子甲基化的关系

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:WAYA123456
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目的 探讨维吾尔族妇女宫颈病变及其人乳头状瘤病毒( human papillomavirus,HPV)感染与低相对分子质量蛋白酶体(low molecular-weight protein,LMP)基因启动子区甲基化水平的关系和意义.方法 利用专业软件设计LMP2和LMP7基因启动子区含CpG岛特异性PCR引物,对SiHa宫颈癌细胞DNA进行亚硫酸氢盐修饰、目的片段扩增、质粒载体克隆和测序,确定该区域所含CpG序列甲基化情况;收集维吾尔族妇女正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)患者新鲜组织和石蜡组织标本78例,并提取DNA,采用Sequenom MassARRAY DNA技术平台(质谱分析),定量分析LMP2和LMP7基因启动子甲基化水平,同时以HPV分型芯片鉴定HPV亚型,分析基因甲基化与HPV感染的关系;应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测LMP2、LMP7mRNA和蛋白的表达,并分析蛋白表达与基因甲基化的关系.结果 LMP2和LMP7基因相应目的片段各含有22个CpG位点,在SiHa宫颈癌细胞基因组DNA中,只有LMP7有2个位点发生甲基化.宫颈病变病理过程伴随着LMP7基因CpG片段甲基化水平改变,其在CSCC和CIN组织的甲基化率(0.1864±0.0893和0.0728±0.0548)高于正常宫颈上皮组织(0.0652±0.0488),差异有统计学意义(P<0.05).随着宫颈病变的加重LMP7 mRNA和蛋白表达逐渐下调,各组间表达差异具有统计学意义(P<0.05),LMP7蛋白表达随着该基因甲基化率增高而降低(F=8.69,P=0.035).而LMP2蛋白表达在3组间差异无统计学意义(P>0.05).HPV分型芯片检出12种HPV基因型,其中HPV16感染率构成比为52/78(66.7%),HPV16亚型阳性与宫颈病变进程及LMP7基因甲基化率升高趋势正相关(t=1.996,P=0.049).结论 LMP7基因启动子区CpG岛甲基化是一种宫颈癌病变特异性改变,与HPV16感染可能存在密切关系.
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