【摘 要】
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为了探讨特异性降低Toll样受体9(TLR9)表达后,小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cell,DC)对CpG刺激的应答反应,我们合成了特异性干扰TLR9表达的小干扰RNA(small-interferenc
【机 构】
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南京大学医学院免疫与生殖生物学实验室,南京大学医学院附属鼓楼医院风湿免疫科,南京大学江苏省医学分子技术重点实验室,
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为了探讨特异性降低Toll样受体9(TLR9)表达后,小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cell,DC)对CpG刺激的应答反应,我们合成了特异性干扰TLR9表达的小干扰RNA(small-interference RNA,siRNA),用Lipofectamine2000转入DC,利用Block-iT检测评估了转染效率;RT-PCR方法检测了干扰效果;Annexin V和PI双染检测了细胞凋亡率。进一步在CpG作用后,用流式细胞术分析了DC表面标志CD40和MHC II的表达以及DC吞噬FITC-dextran(右旋糖酐)的能力。结果显示,siRNA转染效率较高,TLR9表达被显著下调。干扰TLR9后DC在CpG作用下,表面标志CD40和MHCII表达未被上调,但吞噬功能维持较强的水平,DC表现出未成熟状态。这些结果提示,我们建立的RNA干扰(RNA in-terference,RNAi)方法能够有效阻断TLR9的表达,为进一步研究CpG信号刺激对DC成熟和功能变化的影响提供了一种有效工具。
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