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为评估饲料中25-羟基维生素D3测定方法的不确定度,参照农业行业标准《饲料中25-羟基维生素D3的测定》(N Y/T 3879-2021),利用高效液相色谱法对复合预混合饲料中的25-羟基维生素D3进行测定.分析并评估了检测过程中样品前处理、标准系列溶液配制、标准曲线绘制、方法重复性及样品添加回收所引入的不确定度,得到了合成标准不确定度及扩展不确定度.结果显示,复合预混合饲料中25-羟基维生素D3的含量为(10.8±0.80)mg/kg时,其合成标准不确定度和扩展不确定度分别为0.40 mg/kg和0.80 mg/kg,k=2;结果表明,不确定度主要来自标准品相关的分量,其中标准曲线及标准溶液的配制贡献较大.