【摘 要】
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牛乳中β酪蛋白含有多种变异体，其中A1β-酪蛋白（A1）和A2β-酪蛋白（A2）是其最常见的2种变异体。由于A1和A2蛋白在氨基酸序列上仅存在个别氨基酸的差异，因此通过常规的分离、纯化手段较难以实现纯度较高的A1和A2蛋白的制备。本研究利用分子生物学手段，分别构建含有CSN2-A1和CSN2-A2目的基因的重组质粒载体pET28a （+）-CSN2-A1和pET28a （+）-CSN2-A2。将构
【机 构】
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乳业生物技术国家重点实验室上海乳业生物工程技术研究中心光明乳业股份有限公司，乳业研究院
【基金项目】
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上海乳业生物工程技术研究中心（19DZ2281400）；
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牛乳中β酪蛋白含有多种变异体，其中A1β-酪蛋白（A1）和A2β-酪蛋白（A2）是其最常见的2种变异体。由于A1和A2蛋白在氨基酸序列上仅存在个别氨基酸的差异，因此通过常规的分离、纯化手段较难以实现纯度较高的A1和A2蛋白的制备。本研究利用分子生物学手段，分别构建含有CSN2-A1和CSN2-A2目的基因的重组质粒载体pET28a （+）-CSN2-A1和pET28a （+）-CSN2-A2。将构建的重组表达载体导入到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达和纯化。实验结果表明在0.2mmol/L IPTG，37℃下诱导表达4h可获得大量蛋白，但是通过SDS-PAGE电泳显示目的蛋白以包涵体形式表达，存在于细胞破碎后的沉淀中。通过洗涤、溶解、镍柱亲和色谱纯化、复性以及鉴定等步骤最终可获得纯度大于90%（PAGE）的A1和A2重组蛋白，从而为制备A1和A2蛋白提供新的途径。
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