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Pseudomonas putida S1海藻糖合成酶表达质粒的构建及诱导条件优化

来源 :生物加工过程 | 被引量 : 0次 | 上传用户：cyuch

【摘 要】

：

采用PCR方法从Pseudomonas putida S1中克隆出编码海藻糖合成酶的基因treS，并与质粒pQE30T相连，构建了表达质粒pQE—TS2。将此重组质粒转化宿主菌E．coliM15进行诱导表达。十二烷

【作 者】

：

姚林 段作营 史仲平 毛忠贵 

【机 构】

：

江南大学工业生物技术教育部重点实验室

【出 处】

：

生物加工过程

【发表日期】

：

2008年5期

【关键词】

：

PSEUDOMONAS PUTIDA 海藻糖合成酶 克隆 表达 诱导条件 Pseudomonas putida   trehalose synthase   c 

【基金项目】

：

国家863计划资助项目（2006AA020101）

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采用PCR方法从Pseudomonas putida S1中克隆出编码海藻糖合成酶的基因treS，并与质粒pQE30T相连，构建了表达质粒pQE—TS2。将此重组质粒转化宿主菌E．coliM15进行诱导表达。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶SDS—PAGE电泳结果表明，treS基因在大肠杆菌中获得了高效表达。通过对诱导温度、诱导剂浓度、加诱导剂时间和诱导时间的优化研究，在菌液生长至OD600值为0．6时，加入诱导剂IPTG至终浓度0．01mmol／L，20℃诱导20h，蛋白的表达量达到每克干细胞89mg的蛋

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