犬钩虫(Ancylostoma caninum)daf-1基因的克隆和表达鉴定

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目的对犬钩虫(Ancylostom acaninum)TGF-βⅠ型受体dnf-1基因进行了克隆和鉴定,并在原核系统中进行表达。方法以犬钩虫总RNA为模板,用RT-PCR对犬钩虫TGF-β受体基因dnf-1的cDNA进行扩增和克隆,用PCR筛选阳性克隆,双酶切鉴定并测序。将测序正确的阳性克隆双酶切后构建到表达载体pET-32m中,转化到E.coliDH5α内,提取质粒,酶切鉴定阳性,再转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)菌株内,对转化菌株用IPTG进行诱导培养。收集培养液,破菌、离心进行SDS-
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