检测人血清中SARS冠状病毒IgG抗体的ELISA方法建立及其应用

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为了建立方便、敏感和特异的SARS病毒血清学诊断方法 ,利用PQE30表达系统在大肠杆菌M1 5中分段高效表达了SARS病毒N蛋白。通过金属鏊合亲和层析纯化了目的蛋白N - 1和N - 2 ,Westernblot结果显示 ,两个表达蛋白均具有较好的抗原性。然后将N - 1和N - 2蛋白共同包被 ,建立了检测人血清中SARS病毒IgG抗体的间接ELISA法。用此方法检测 1 2 0例临床诊断为SARS的病人和 2 4 4个不同年龄组正常人血清IgG抗体 ,结果 1 2 0例SARS病人的第一份血清IgG抗体总阳性率为 6 0 0 % ,发病第 0~ 7、8~ 1 0、1 1~ 1 4、1 5~ 2 7和 2 8天后的血清中 ,SARS病毒IgG抗体阳性率分别为 0、1 1 1 %、6 0 0 %、6 0 5 %和 70 3% ;而 2 4 4份正常人血清检测结果均为阴性 ,包括 1 0 0份1 4岁以下儿童血清也未发现假阳性。结果表明 ,利用大肠杆菌表达的N蛋白完全能够替代全病毒灭活抗原 ,所建立的间接ELISA方法简单 ,价格低廉 ,能保证生物安全 ,对SARS可疑病例的确诊和排除具有重要的实际应用价值 ,可用于SARS高危人群的血清流行病学监测 ,SARS疫情的控制和预防 ,以及SARS病毒蛋白功能的研究
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