【摘 要】
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目的: 获得兔抗人CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽的多克隆抗体, 并对多克隆抗体进行初步鉴定和应用.方法: 应用Fmoc法化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～3
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所免疫学研究室,济南军区联勤部军事医学研究所流行病学研究室,北京蛋白组研究中心抗体工程研究室,美国纽约州立大学巴弗罗分校小儿科学系
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目的: 获得兔抗人CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽的多克隆抗体, 并对多克隆抗体进行初步鉴定和应用.方法: 应用Fmoc法化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的CXCR3-B分子的多肽与KLH交联;皮下注射抗原免疫日本大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、免疫组化等初步鉴定和应用.结果: 分别化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽, 纯化后多肽纯度分别为98%、 88.54%及80%, 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价分别为1∶ 32 000(0.1 mg/L), 1∶ 4 000(3 mg/L)和1∶ 1 000(10 mg/L).3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中相对分子质量(Mr)约为50的CXCR3-B分子, 相应抗原定位于3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中的血管内皮细胞.结论: 所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、免疫印迹和免疫组化等实验, 为确定CXCR3-B分子的组织及细胞分布和定位、寻找CXCR3-B相互作用的分子提供了有力的工具.
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