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目的建立快速诊断结核杆菌利福平（RFP）耐药的方法，探讨其临床应用价值。方法设计5条覆盖rpoB基因热点突变区域的MGB探针，结合实时PCR方法检测结核杆菌rpoB基因的点突变。结果50株临床分离结核杆菌菌株中，12株RFP耐药株，38株敏感株。双探针实时PCR方法检测结核杆菌13株检出rpoB基因突变，突变率占26％。531位点单突变11株，526位点单突变1株，531、526双位点联合突变1株。12株耐药株均检出rpoB基因突变。结论双探针实时PCR技术能快速、准确地检测结核杆菌rpoB基因位点的突变