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在酸性条件下,硫酸庆大霉素(GEN)、硫酸妥布霉素(TOB)与甲基蓝(MB)反应,生成离子缔合物,使甲基蓝褪色,其最大褪色波长位于606nm(GEN)和610nm(TOB),表观摩尔吸光系数(ε)为1.80×104(GEN)和2.93×104(TOB)L·mol-1·cm-1;庆大霉素、妥布霉素浓度在0~1.2×10-5mol·L-1范围内遵从比耳定律.该法用于市售药物及人体尿液中庆大霉素及妥布霉素含量的测定,结果满意.