目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)及p38通路在P2Y嘌呤受体活化对前列腺癌细胞产生的生物学效应中所起的作用.方法脂质体法将负显性MAPK激酶1(KA-MEK1)转染高转移性前列腺癌1E8细胞;Western印迹法检测ERK1/2活化水平;应用细胞计数、软琼脂集落形成实验、体外侵袭实验检测ERK1/2及p38通路在P2Y嘌呤受体活化对前列腺癌细胞生长、集落形成、体外侵袭效应中的作用;用流式细胞术检测ATP对凋亡的影响.结果转染KA-MEK1抑制了细胞的ERK1/2活性.常规培养6 d时,KA-MEK1细胞的活细胞数比对照组细胞减少了约71%;以100μmol/L ATP连续刺激6 d,KA-MEK1细胞的生长被进一步抑制17.2%;用10 μmol/L p38抑制剂SB203580预处理细胞,可以封闭ATP所诱导的额外生长抑制效应.说明持续P2Y受体活化可抑制前列腺癌细胞生长,ERK1/2和p38通路均在其中起作用.细胞凋亡并非ATP生长抑制作用的主要机制.在软琼脂集落形成实验中,KA-MEK1细胞比对照组细胞形成的集落小,而且数目减少了约75%;在抑制了ERK1/2活性后,以ATP预处理并不显著改变细胞的集落形成能力;进一步在抑制了ERK1/2活性的基础上,以SB203580处理细胞,对细胞集落形成能力也无明显影响.说明在影响癌细胞集落形成方面,主要是ERK1/2通路起作用.在体外侵袭实验中,KA-MEK1细胞的穿膜细胞数比对照组细胞减少了41%;以ATP刺激12 h可以促进前列腺癌细胞体外侵袭,其中KA-MEK1细胞的穿膜细胞增加率低于对照组细胞;进一步以SB203580处理细胞,可以抑制ATP诱导的促侵袭效应.说明ERK1/2和p38通路在ATP促侵袭效应中均发挥主要作用.结论P2Y嘌呤受体激活程度的差异可导致不同效应,并涉及不同信号传导通路.持续P2Y嘌呤受体活化抑制前列腺癌细胞生长,其中有ERK1/2及p38通路的参与;短暂P2Y嘌呤受体活化抑制前列腺癌细胞集落形成但促进前列腺癌细胞体外侵袭,在前者ERK1/2起重要的作用,后者有ERK1/2和p38通路的参与。
MEK-MAPK信号通路在P2Y嘌呤受体活化对人前列腺癌细胞效应中的作用
【摘 要】
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目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)及p38通路在P2Y嘌呤受体活化对前列腺癌细胞产生的生物学效应中所起的作用.方法脂质体法将负显性MAPK激酶1(KA-MEK1)转染高转移性前列腺癌1E8细胞;Western印迹法检测ERK1/2活化水平;应用细胞计数、软琼脂集落形成实验、体外侵袭实验检测ERK1/2及p38通路在P2Y嘌呤受体活化对前列腺癌细胞生长、集落形成、体外侵袭效应中的作用;用流
【机 构】
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100083,北京大学医学部病理学系,100083,北京大学医学部病理学系,100083,北京大学医学部病理学系,100083,北京大学医学部病理学系
【发表日期】
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2004年33期
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