论文部分内容阅读
目的
构建血管内皮生长因子(VEGF)165与基质细胞衍生因子 (SDF)－1双基因共表达腺病毒载体Ad5－VEGF165－IRES－SDF－1，并观察其在缺血大鼠脑组织中的共表达情况。
方法将VEGF165和SDF－1基因通过内部核糖体进入位点(IRES)进行定向连接，以同源重组的形式构建双基因共表达重组穿梭质粒pDC316－VEGF165－IRES－SDF－1，将其与骨架质粒pBHGlox_E1以脂质体转染HEK293细胞，获得有感染能力的重组腺病毒颗粒，经多轮扩增后获得纯化的腺病毒载体Ad5－VEGF165－IRES－SDF－1；以线栓法构建大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，并以立体定向微量注射的方法将构建的病毒载体注入大鼠侧脑室，以RT－PCR和免疫印迹法观察其介导VEGF165和SDF－1基因在缺血脑组织中的共表达情况。
结果PCR、双酶切和基因测序等结果显示，重组质粒和腺病毒载体构建正确，并能够介导VEGF165和SDF－1两种基因在缺血的大鼠脑组织内共表达。
结论成功构建了携带VEGF165和SDF－1双基因的腺病毒载体Ad5－VEGF165－IRES－SDF－1，Ad5－VEGF165－IRES－SDF－1可以介导VEGF165和SDF－1双基因在缺血大鼠脑组织内共表达。